amilCP, синий хромопротеин
Этот хромопротеин из кораллов Acropora millepora, amilCP, естественно проявляет сильный цвет. Белок имеет максимум поглощения при 588 нм, придавая ему синий / фиолетовый цвет, видимый невооруженным глазом, что не требует никаких инструментов для наблюдения. Сильный цвет легко наблюдается как в культуре LB, так и в агаре менее чем за 24 часа после инкубации.
Эта часть была адаптирована к B. subtilis с хвостом LVA. командой UPMC-Paris в 2016 году (см. часть BBa K2180019)
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K592009
Разработчик: Lei Sun Group: iGEM11_Uppsala-Sweden (2011-09-18)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 8-1, дор. 9). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2739 п.н.
Рисунок 8-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 8-2, дорожка 9).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 710 п.н.
Рисунок 8-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
