Эксцизионная гидролаза из фага лямбда E. coli (удаляет профага из генома хозяина путем сайт-специфичской рекомбинации по att сайту)
Содержит таг деградации AAV и два стоп-кодона.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_I11021
Разработчик: mschomp Группа: Antiquity (2004-09-03)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 102-1, дор. 1). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2350 п.н.
Рисунок 102-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом вертикального электрофореза в 7% ПААГ (рисунок 10-2, дорожка 14).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 321 п.н. Длина фрагмента не совпадает! Требуется дополнительное секвенирование.
Рисунок 10-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p400 (100, 200, 300, 400х2, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.).
