Экспрессионная кассета: T7 полимераза для Bacillus Subtilis
Кассета для экспрессии T7 полимеразы в Bacillus Subtilis, содержит RBS SpoVG
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K606017
Разработчик: Cyrille Pauthenier Группа: iGEM11_Paris_Bettencourt (2011-07-07)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 9-1, дор.5). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 4743 п.н.
Рисунок 9-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 9-2, дорожка 5).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 2714 п.н.
Рисунок 9-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
