bhal лакказа из Bacillus halodurans с T7 промотором, RBS и His-хвостом
Использование в биологии
За последние несколько лет большое внимание было обращено на лакказы из-за их способности окислить как фенольные, так и нефенольные соединения, связанные с лигнином, а также высокостабильные загрязнители окружающей среды. Это делает их очень полезными для приложений, касающихся нескольких биотехнологических процессов. Например, детоксификации промышленных стоков из бумажной и целлюлозной, текстильной и нефтехимической промышленности.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K863020
Разработчик: Isabel Huber Группа: iGEM12_Bielefeld-Germany (2012-09-18)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 5-1, дор.12). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3627 п.н.
Рисунок 5-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 11-2, дорожка 01).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 1598 п.н.
Рисунок 11-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
