CcdB
Кодирующий регион гена ccdB (контролирует клеточную смерть). Ген выделен из плазмиды pEntr-3C, имеет две мутации и стоп-кодон, отличный от такового во фрагменте BBa_P1010.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K805013
Разработчик: Han Jiapeng Группа: iGEM12_HUST-China (2012-09-20)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 101-1, дор.8). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2376 п.н. Не совпадает длина!!!
Рисунок 101-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом вертикального электрофореза в 7% ПААГ (рисунок 10-2, дорожка 8).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 347 п.н. Не совпадает длина!!! Требуется подтверждение секвенированием.
Рисунок 10-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p400 (100, 200, 300, 400х2, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.).
