FadA, ген Salmonella enterica LT2, ответственный за деградацию жирных кислот
FadA ген S. enterica и его аналог в E.coli имеют схожую функцию. Тем не менее, эффективность деградации у Salmonella-FadA выше.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K861042
Разработчик: Kuanwei Sheng Группа: iGEM12_WHU-China (2012-09-06)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 6-1, дор. 2). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3234 п.н.
Рисунок 6-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 6-2, дорожка 2).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 1205 п.н.
Рисунок 6-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
