HSP промотор
Промотор находится 5’ upstream от инициирующего кодона AUG для groE. Промотор имеет в своем составе консенсусные -35 и -10 регионы, распознаваемые sigma32 RNAP. Высокая промоторная активность индуцируется тепловым шоком.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K873002
Разработчик: yue hu Группа: iGEM12_SEU_A (2012-09-18)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 101, дор.2). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2117 п.н.
Рисунок 101. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом вертикального электрофореза в 7% ПААГ (рисунок 10-2, дорожка 2).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 88 п.н.
Рисунок 10-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p400 (100, 200, 300, 400х2, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.).
