Ptms – конститутивный промотор E. coli и B. subtilis
Ptms is – конститутивный промотор, который распознается SigA фактором Bacillus subtilis. Поскольку E. coli не обладает высокой специфичностью в распознавании транскрипционных и транляционных сигналов, Ptms также функционален и в E. coli. В некоторых экспериментах показана довольно низкая эффективность транскрипции при использовании Ptms в B. subtilis. ( Moran et al., 1982).
Характеризация Ptms: BBa_K733009
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K733001
Разработчик: GU, Bida; SUN Fei Группа: iGEM12_HKUST_Hong_Kong (2012-09-16)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 101-1, дор.4). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2135 п.н.
Рисунок 101-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом вертикального электрофореза в 7% ПААГ (рисунок 10-2, дорожка 4).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 106 п.н.
Рисунок 10-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p400 (100, 200, 300, 400х2, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.).
