YF1 белок-сенсор синего света
YF1 – фьюз из белков YtvA (B subtilis) и FixL (B japonicum). Содержит N-концевой регион YtvA (1-127) и C-концевой регион FixL (258-505), соединенные винтовым линкером. Освещение гибридной киназы YF1 уменьшало активность киназы в ~ 1000 раз in vitro. YF1 также контролирует генную экспрессию в зависимости от освещения in vivo.
Литература
Moglich A, Ayers RA and Moffat K. (2009) Design and Signaling Mechanism of Light-Regulated Histidine Kinases. J. Mol. Bio. 385, 5, 1433-1444.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K592004
Разработчик: Lei Sun Группа: iGEM11_Uppsala-Sweden (2011-09-17)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 9-1, дор.10). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3201 п.н.
Рисунок 9-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 9-2, дорожка 10).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 1172 п.н.
Рисунок 9-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
