Алкоголь-ацетилтрансфераза I; превращает изоамиловый спирт в изоамилацетат (запах банана)
BBa_J45014 кодиреут алкоголь-ацетилтрансферазу I - производноне ATF1 из Saccharomyces cerevisiae. ATF1 катализирует конверсию изоамилового спирта в изоамилацетат, имеющий банановый запах.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_J45014
Разработчик: Andr� Green II Группа: iGEM2006_MIT (2006-07-31)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 2-1, дор.2). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3651 п.н.
Рисунок 2-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 2-2, дорожка 2).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 1622 п.н.
Рисунок 2-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
