Гем-оксигеназа (ho1) из Synechocystis
Один из двух генов, необходимых для биосинтеза фикоцианобилина (PCB) из гема. Окисляет гем с помощью кофактора ферредоксина, генерируя биливердин IXalpha.
Функционирует в тандеме с BBa_I15009 (http://parts.igem.org/Part:BBa_I15009)
Конечный продукт – PCB - ассоциируется с Cph8, образуя свет-респонсивный белковый комплекс.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_I15008
Разработчик: Jeff Tabor Группа: UTAustin (2004-09-20)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 6-1, дор. 6). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2821 п.н.
Рисунок 6-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI, EcoRV. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 6-2, дорожка 6).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 792 п.н.
Рисунок 6-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
