Ген лизиса (вызывает лизис колицин-продуцирующих бактериальных штаммов)
При активации приводит к лизису штамма-хозяина. Разрушает комплекс колицина с иммунным белком и таким образом активирует эндонуклеазную активность колицина.
Как это работает?
Белок лизиса имеет молекулярный вес 4872Da и выполняет две функции, которые играют важную роль в регуляции активности колицина E7 (ColE7):
- Высвобождение ColE7 из комплекса «ColE7—иммунный белок» (активирует эндонуклеазную активность ColE7)
- Частичный лизис мембраны штамма-хозяина (индуцирует лизис клеток, высвобождая их содержимое, что приводит к диффузии белка ColE7 к штаммам патогенных бактерий )
Больше информации по ссылке BBa_K117010(detection system)
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K117000
Разработчик: Nguyen Xuan Hung Группа: iGEM08_NTU-Singapore (2008-10-07)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 102-1, дор.3). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2214 п.н.
Рисунок 102-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом вертикального электрофореза в 7% ПААГ (рисунок 10-2, дорожка 16).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 185 п.н.
Рисунок 10-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p400 (100, 200, 300, 400х2, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.).
