кДНК UV-B чувствительного белка UVR8 из Arabidopsis thaliana
UVR8 (UV resistance locus 8) - UV-B фоторецептор растений, критический медиатор ответа на UV-B. В отсутствии UV-B представляет собой димер, который разрушается при воздействии UV-B.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K909009
Разработчик: Gintautas Vainorius Группа: iGEM12_ETH_Zurich (2012-09-23)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 5-1, дор.10). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3402 п.н.
Рисунок 5-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 5-2, дорожка 10).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 654 п.н., 585 п.н., 134 п.н.
Рисунок 5-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
