Секретируемая бета-лактамаза млекопитающих
Кодирующая последовательность составлена из секреторной сигнальной последовательности человеческого IgG, объединенной с последовательностью TEM-1 бета-лактамазы.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K553020
Разработчик: Luca Braga, Niels Ntamati Группа: iGEM11_UNITS_TRIESTE (2011-09-13)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 5-1, дор.3). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2703 п.н.
Рисунок 5-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 5-2, дорожка 3).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 674 п.н.
Рисунок 5-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
