Супержелтый флюоресцентный белок 2 (SYFP2) с сильным сайтом связывания рибосом
Супер желтый флюоресцентный белок 2 (SYFP2) (BBa_K864100) с сильным сайтом связывания рибосом BBa_B0034.
Применение в биологии
Фрагмент может быть использован как репортер. Очень сильная флуоресценция позволяет обнаружить транскрипцию на низких уровнях. Колонии четко видны под УФ с большинством промоторов.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K864102
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 1-1, дор.12). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2811 п.н.
Рисунок 1-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 1-2, дорожка 12).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 782 п.н.
Рисунок 1-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
