Хромопротеин из морского анемона Cnidopus japonicus
Хромопротеин из морского анемона Cnidopus japonicus, cjBlue, при экспрессии дает окрашивание в темно-зеленый цвет. Окрашивание происходит медленнее, чем для белков amilCP (BBa_K592009), amilGFP (BBa_K592010), spisPink (BBa_K1033932), asPink (BBa_K1033933) и aeBlue (BBa_K864401). Цвет проявляется при культивировании в LB или чашках Петри с агаром после 24-48 часов инкубации. Последовательность оптимизирована по кодонам для экспрессии в E coli.
Применение в биологии
Используется как репортер.
iGEM11_Uppsala-Sweden: Конститутивная экспрессия хромопротеина cjBlue (BBa_K592011) в Escherichia coli.
Литература
[1] Chan MC, Karasawa S, Mizuno H, Bosanac I, Ho D, Privé GG, Miyawaki A, Ikura M. (2006) Structural characterization of a blue chromoprotein and its yellow mutant from the sea anemone Cnidopus japonicus. J. Biol. Chem. 281(49). 37813-9
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K592011
Разработчик: Antonio Ascue Avalos Группа: iGEM11_Uppsala-Sweden (2011-09-18)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 2-1, дор.4). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2772 п.н.
Рисунок 2-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 2-2, дорожка 4).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 743 п.н.
Рисунок 2-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
