fwYellow, желтый хромопротеин
Этот хромопротеин (также известный как FezziwigYFP) дает яркий цвет при экспрессии. Окрашивание происходит медленнее, чем в случае других хромопротеинов – таких как amilCP (BBa_K592009), amilGFP (BBa_K592010), spisPink (BBa_K1033932), asPink (BBa_K1033933) и aeBlue (BBa_K864401). Цвет проявляется при культивировании в LB или чашках Петри с агаром после 24-64 часов инкубации.
Применение в биологии
Используется как репортер.
iGEM13_Uppsala: Конститутивная экспрессия хромопротеинов meffRed BBa_K1033922, aeBlue BBa_K1033929, tsPurple BBa_K1033905, asPink (asCP) BBa_K1033927, fwYellow BBa_K1033910, meffBlue BBa_K1033902, meffRed BBa_K1033922 and scOrange BBa_K1033913 в Escherichia coli.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K1033910
Разработчик: Sabri Jamal Группа: iGEM13_Uppsala (2013-09-17)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 2-1, дор.5). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2784 п.н.
Рисунок 2-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 2-2, дорожка 5).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 755 п.н.
Рисунок 2-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
