Lux оперон (под промотором pBAD) Vibrio Fischeri
lux оперон Vibrio fischeri. Для ослабления контроля над LuxR гены Lux C, D, A, B, E поместили под промотор pBad. Подробнее по ссылке Cambridge iGEM 2010 website.
lux опероны бактерий кодируют пять ферментов, вовлеченных в генерацию светового излучения: LuxA и LuxB – две субъединицы бактериальной люциферазы, а также LuxC, LuxD и LuxE, синтезирующие субстрат для реакции (tetradecanal).
Точная функция гена LuxG неизвестна. По всей вероятности, он не является необходимым для продукции света, но его присутствие увеличивает эффективность генерации светового излучения.
Совместимость
Chassis: Возможно использование Top 10 (Invitrogen), BW25113 DELTA H-NS::kan и H-NS mutant JM 230 H-NS
Figure 1 - E.coli cells (Invitrogen TOP 10) трансформированные BBa K325909 в 96-луночном планшете.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K325909
Разработчик: Theo Sanderson and Will Handley Группа: iGEM10_Cambridge (2010-10-23)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 4-1, дор.4). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 9707 п.н.
Рисунок 4-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 4-2, дорожка 4).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 7678 п.н. Требуется дополнительное картирование.
Рисунок 4-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
