RFP (красный флюоресцентный белок)-кодирующий девайс
Используется для клонирования. Колонии становятся красными при обычном свете через 18 часов. Более мелкие колонии визуализируются при УФ. RFP не содержит последовательности для деградации, но содержит сильный RBS.
- LacI чувствительный
- CAP чувствительный
(система может не сработать, если присутствуют белки LacI или CAP).
BBa_J04450: Визуализация (не УФ)
BBa_J04450: УФ-визуализация при 254nm
BBa_J04450 Колонии
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_J04450
Разработчик: Caitlin Conboy Группа: Antiquity (2004-03-15)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 2-1, дор.11). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 3139 п.н.
Рисунок 2-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 2-2, дорожка 11).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 1110 п.н.
Рисунок 2-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
