Белок-фьюз из S-Layer SgsE и mCitrine
S-layers - «кристаллический» поверхностный слой некоторых архебактерий, содержащий множество белковых мономеров. На границах фаз, в растворах и на разных поверхностях эти белки способны образовывать различные решетчатые структуры. Геометрия структур определяются с помощью C-терминального домена, ответственного за само-сборку и специфичного для каждого белка.
Белки могут использоваться как «скаффолд» для различных нанабиотехнологических нужд – например, при образовании фьюзов доменов само-сборки с другими функциональными белковыми доменами.
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K525305
Разработчик: Timo Wolf Группа: iGEM11_Bielefeld-Germany (2011-09-10)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 9-1, дор.1). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 5199 п.н.
Рисунок 9-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 9-2, дорожка 1).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 3170 п.н.
Рисунок 9-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
