Оранжевая люцифераза светлячка (под pBAD) L. Cruciata
Фрагмент основан на BBa_K325219. Модификации внесены с помощью сайт-направленного мутагенеза. Мутация Ser286Asn позволила получить оранжевую биолюминисценцию.
Цвета эмиссии
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K325218
Разработчик: Anja Hohmann and Ben Reeve Группа: iGEM10_Cambridge (2010-10-23)
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 4-1, дор.3). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 4955 п.н.
Рисунок 4-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 4-2, дорожка 3).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 2926 п.н.
Рисунок 4-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
