Синий флюоресцентный белок (Cyan Fluorescent Protein, CFP
Синетический синий флюоресцентный белок с сайтом связывания рибосом. Происхождение не связано с Aequorea.
Применение в биологии
Может быть использован как репортер. Продукция CFP в E. coli под контролем промотора T7 обозначена ниже как "CFP1" (фрагмент клонирован в pUC19):
Источник: http://parts.igem.org/Part:BBa_K861429002
Выделение плазмидной ДНК
Проводилась трансформация клеток E. coli, штамм Nova-Blue (Novagen). Снятую с агара бактериальную колонию выращивали в среде LB (200 мл) в течении 18 часов. Выделение плазмидной ДНК проводили щелочным лизисом. Дополнительно обрабатывали полученную плазмидную ДНК РНКазой, проводили фенол-хлороформную экстракцию и осаждение этанолом.
Определение концентрации
Методом горизонтального электрофореза (рисунок 1-1, дор.9). Нанесение 1 мкл плазмидной ДНК. Длина линейной формы плазмиды 2794 п.н.
Рисунок 1-1. Электрофореграмма плазмидной ДНК. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
Рестрикционное картирование
Рестрикционное картирование проводили с помощью эндонуклеаз рестрикции EcoRI, PstI. Разделение продуктов реакции проводили методом горизонтального электрофореза в 1,5% агарозном геле (рисунок 1-2, дорожка 9).Ожидаемая длина фрагментов 2029 п.н., 765 п.н.
Рисунок 1-2. Электрофореграмма продуктов рестрикции. М – маркерная лестница p250 (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000 п.н.).
